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Tecnologia de DNArecombinante
Esta técnica baseia – se na utilização de ferramentas moleculares, nomeadamente:
Enzimas de restrição
Ligases do DNA
Vectores (plasmídeos)
A obtenção e a expressão de uma molécula de rDNA processa – se do seguinte modo:
Selecciona – se uma molécula de DNA dadora, contendo o gene com interesse que se pretende transferir e clonar, e um vector adequado.
A molécula de DNA e o vector são tratados com a mesma enzima dês restrição, que corta as duas moléculas em regiões com a mesma sequência de nucleótidos.
Misturam – se os fragmentos de restrição da molécula de DNA e vector e juntam – se ligases de DNA. O vector e os fragmentos de restrição emparelham pelas extremidades coesivas, que são complementares, e a ligase estabelece a ligação.
O vector, contendo o DNA dador, é transferido para uma célula ou organismo receptor.
O DNA dador é incorporado, através de um choque térmico, no genoma da célula ou organismo receptor, que passa a possuir um DNA recombinante.
Um meio selectivo ou testes químicos permitem identificar as células que exprimem o gene desejado. No processo descrito formam – se fragmentos de restrição que não tem o gene desejado e nem todas as células receptoras incorporam o DNA dador.
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