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DNAcomplementar - cDNA
Os procariontes são organismos muito utilizados em Engenharia Genética porque são fáceis de cultivar, têm rápido crescimento e processos bioquímicos conhecidos. No entanto, não processam o mRNA e , quando recebem genes com intrões, estes não são retirados e a proteína produzida não é funcional.
Este problema pode ser ultrapassado pela obtenção e transferência de DNA complementar (cDNA).
O processo de obtenção de cDNA é o seguinte:
Isola – se uma molécula de mRNA funcional das células.
Adiciona – se transcriptase reversa e nucleótidos livres. A transcriptase reversa cataliza a síntese de uma cadeia simples de DNA a partir de um molde de mRNA.
Junta – se uma enzima que degrada o mRNA que serviu como molde e DNA polimerase que cataliza a formação da cadeia complementar do DNA.
O cDNA pode ser inserido através de um vector contendo o promotor e sequências reguladoras.
Aplicações:
Obtenção de cópias de genes que codificam produtos com interesse.
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